La noche ha caido sobre el Smithsonian de Washington. Los guias se han ido a casa, las luces estan apagadas, los escolares estan en la cama bien arropados... pero algo increible empieza a agitarse cuando el antiguo vigilante nocturno Larry Daley (Ben Stiller) se ve atraido a la mayor aventura de cuantas ha vivido, la que dejaria mas atonito a cualquiera, en la que la historia cobra realmente vida. En esta segunda entrega de la saga de Noche en el Museo, Larry libra un combate de tan epicas proporciones que solo podria desarrollarse en los pasillos del museo mas grande del mundo. Ahora, Larry debe tratar de salvar a sus antes inanimados amigos de lo que podria ser su ultima estancia entre las maravillas del Smithsonian, todas las cuales, desde los famosos cuadros que adornan las paredes a las naves cohete de las salas, adquieren de repente ideas propias.